一 、精子功能检测及意义
1 、 计算机辅助精液分析 ( Computer-aided s emen analysis, CASA ) : 手工精液分析往往带有很大的主观性,不同的技术人员分析的结果有时相差甚远,对精子运动能力的判断缺少严格的量化指标。 计算机辅助精 液 分析 与 人工方法 相比 具有 客观、高效、高精度的 优点 ,尤其能分析与精子运动功能相关的多种参数。 广西医科大学第四附属医院泌尿外科谢广静
2 、 精子形态学分析: 正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一,人工授精或 ICSI 的成功率与正常形态精子百分率密切相关。精子形态的任何异常改变均表示睾丸功能受损害,异常精子明显增高也称畸形精子症。精子畸形率的增高,往往间接反映了睾丸生精功能的障碍,也必然影响到精子的活力和受精能力。精子形态异常往往与精子减少或活力差同时存在,但有时也可单独存在。目前,用于精子形态学分析的染色方法有改良巴氏染色法、 HE 染色法、 Diff-Quik 染色法、 Shorr 染色法、瑞氏染色法和瑞 - 吉染色法, WHO 手册推荐使用改良巴氏染色法。
评估精子形态学的 严格标准 为正常形态精子比例应大于 4% 。
3 、精子顶体完整率分析: 精子顶体内含有多种水解酶,如顶体蛋白酶、透明质酸酶、酸性磷酸酶等。在受精时,精子释放顶体酶,分解卵子外周的放射冠与透明带,进入卵子内。顶体酶也能降低宫颈黏液的黏度,提高精子穿透宫颈黏液的能力。因此,精子顶体缺陷与男性不育有密切关系。
精子顶体完整率的分析需要对精子进行涂片和染色,可与精子形态学分析一同进行检测。
4 、精子 顶体酶 检测 : 顶体酶活性 是评价 精子质量 的重要指标之一 ,其活 性降低是 导致 男性 不育 的重要原因之一 。临床 上对于少弱 精子症 、 生殖系统感染 、精索静脉曲张、不明原因不育以及拟进行 AIH 和 IVF 的患者均可进行精子顶体酶检测。
5 、精子尾部低渗肿胀试验 (HOST) : 精子膜上含有丰富的多聚不饱和脂肪酸入多种蛋白成分,精子膜的功能与精子获能、顶体反应及精卵融合密切相关。在低渗溶液中,水分子通过精子膜进入精子,使精子体积增大而膨胀,这是活精子膜功能正常的标志,而膜功能不全(包括死精子)的精子表现为不膨胀。 HOST 是精子膜功能测定的一种有效方法,可通过精子的低渗肿胀率来预测精子的受精能力。
6 、精子 DNA 碎片率检测 (SDFA) : 不育及较低生育力的男性具有高出正常男性 2-5 倍的精子 DNA 碎片率。精子 DNA 完整性对自然受精或人工授精 以及 胚胎的发育至关重要。研究表明,丈夫精子 DNA 受损率超过 30 % 时,自然受精率很低。
意义: ① SDFA 能在精液常规检查的基础上,对精液状况进行更完善的评估,更能全面的反映男性的生育能力,为临床医生提供了重要的辅助参考价值; ② SDFA 为不育患者选择更适合的助孕方式提供科学的参考依据 , 可用于辅助生殖技术评估,特别是卵细胞胞质内单精子注射 ( ICSI) 技术; ③ SDFA 是对男科 / 泌尿外科 / 生殖中心都有效的一项诊断技术。
SDFA 检测的适应证: ① 所有少弱精子症的男性; ② 存在精索静脉曲张的男性; ③ 服用某些药物的男性; ④ 有不良生育史的男性 。
检测原理
精子染色质扩散试验 (sperm chromatin dispersion test , SCD 试验 ) :正常生育男子和不育患者的 SCD 值有显著差异 , 是一种简便、快速、准确且重复性较好的方法。将精子悬液与琼脂糖混合铺于载玻片上 , 酸处理后溶解细胞去除核蛋白 , 染色 , 最后用荧光显微镜观察。去除核蛋白后 , 精子染色质结构松散 , DNA 环附着于残留的核结构 , 形成光晕。实验发现 , 正常的精子 DNA 产生扩散的光晕 , 而损伤的精子 DNA 则不产生或产生很小的光晕。
二 、精液生化检测项目及临床意义
1 、精浆 抗精子抗体检测 :抗精子抗体对精子 有制动和细胞毒作用 : ① 影响精子活力及抑制精子穿透宫颈黏液; ② 抑制精子获能、顶体反应及 精卵融合 ; ③ 影响胚胎的发育。 因此,对于临床上各种不明原因的少弱精子症、畸形精子症、生殖系统感染、外伤和手术后不育的男性患者均应进行精浆抗精子抗体检测。
目前抗精子抗体检测方法有: ELISA 、免疫珠试验和混合抗球蛋白反应试验 (MAR) 三种方法。
2 、 精浆 α-葡糖苷酶测定: 精浆中存在两种α-葡糖苷酶的异构体,其中中性α-葡糖苷酶占80%,来源于附睾;酸性α-葡糖苷酶占20%,主要来源于前列腺。精浆总α-葡糖苷酶活性高低可反映附睾分泌功能,为目前我国男科实验室常用方法;精浆中性α-葡糖苷酶为 WHO 手册推荐方法。
3 、精浆果糖检测: 精浆果糖可为精子的运动提供能量。当精囊腺功能紊乱时,精液总量减少,精浆果糖含量降低,进而引起精子活力不足,导致不育。精浆果糖测定几乎在世界上所有男科学实验室进行。而且, WHO 也推荐以精浆果糖浓度测定作为评价精囊腺功能的指标。
目前,用于检测精浆果糖的方法有间苯二酚显色法、气相层析法、吲哚显色法等,其中间苯二酚法操作简单,无须特殊仪器,特异性好,为多数男科实验室采用。
4、 精浆锌检测: 锌直接参与精子生成、成熟、激活和获能过程,对精子活力、代谢及其稳定性都具有重要作用。长期缺锌会致使睾丸发育不良、性腺功能减退。 检测精浆 锌 的水平,主要用于前列腺炎和男性不育的体外诊断。精浆锌的正常参考值为 0.8~2.5mmol/L 。 精浆锌浓度低于正常参考值下限,提示前列腺分泌功能低下,可能与感染或男性不育有关。精浆锌浓度高于正常参考值上限,可能与死精子症或阻塞性无精子症有关。
5 、 精浆酸性磷酸酶 : 精浆酸性磷酸酶 主要由前列腺分泌, 可通过磷酸化作用水解精液中的 磷酸胆碱 、磷酸 甘油 和 核苷酸等分 子物质,此酶在精子功能成熟中具有一定作用,并参与精子代谢 。 其 活力高低可反映前列腺的功能,精浆酸性磷酸酶活力下降,说明前列腺功能低下, 常见于前列腺炎; 其活力显著增高,对于诊断前列腺癌及前列腺良性增生有重要意义。
6 、 精 浆弹性蛋白 酶: 精浆弹性蛋白酶由活化的粒细胞分泌,已证实是一敏感和定量的生殖道炎症指标。男性生殖道感染时,分叶核粒细胞参与吞噬病原体等抗炎反应,并分泌大量弹性蛋白酶至胞外。弹性蛋白酶与其他氧化物质共同发挥局部抗炎效应,弹性蛋白酶与随后分泌的 α1蛋白酶抑制剂结合,形成弹性蛋白酶-α1蛋白酶抑制剂复合物,该复合物浓度与弹性蛋白酶释放量高度相关,可作为分叶核粒细胞生殖道抗感染的活性检测指标。
研究表明,精浆弹性蛋白酶浓度与精液中白细胞呈良好相关性。精液白细胞浓度>1×10 6 /ml时,精浆弹性蛋白酶浓度常>1000ng/ml。但当精液白细胞浓度<1×10 6 /ml时,亦有少数标本精浆弹性蛋白酶浓度>1000ng/ml。精浆弹性蛋白酶可作为隐性生殖道感染的诊断及愈后检测指标。并可用于治疗的随访。
三、前列腺液检查
前列腺上皮细胞能持续分泌一种稀薄的无色乳状液,呈弱酸性 (pH6.5 左右 ) ,内含卵磷脂小体、多种蛋白质成分以及锌离子等。检测前列腺按摩液有助于判断前列腺功能,诊断前列腺炎及对男性不育进行辅助诊断。是男科实验室一项基本和重要的检测项目。